微生物部分检验项目及检查目的 一览丨最全病原微生物检测技术 健明迪

样品的采集是微生物检验的重要组成局部，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和分歧性，又要保证整个微生物检验进程在无菌操作的条件下停止。小编整理了局部微生物检测进程中取样、样液制备、稀释、接种、培育的复杂操作，大家一同窗习参考。

一、微生物取样及样液制备

1 样品标识

取样时，将样品按不同的污染水平从低污染水平到高污染水平顺序陈列，

并对出对应的标识，其中按细菌数平皿、大肠菌群平皿、金黄色葡萄球菌平皿的顺序，2-3个样品一摞。如图

2 样品采取

（1）固体样品

① 开启部位及其周围用酒精棉停止消毒，再用火焰灭菌的剪刀剪开，如图

② 在电子称上放入无菌均质袋（手不要碰及袋口）去皮调整至零，如图4

③ 用火焰灭菌后的剪刀和镊子取样，称取25g样品，如图

④ 参与225ml灭菌磷酸盐缓冲液（开盖瓶塞时瓶口部和瓶塞应在火焰经过1-2次，以杀灭从空气中落入杂菌）后，均质或待均质，如图

⑤ 擦拭洁净剪刀镊子后浸泡于75%酒精容器中并将样品封口；将袋子折叠后用拍击式均质器均质约30秒作为样液，此时均质袋内要设定为不含空气（可依据样品不同状况相应调整均质时间），如图

（2）液体样品

①冷冻样品完全解冻后运用。

②75%酒精棉消毒开启部位及其周围，再用火焰灭菌的剪刀开启，用灭菌吸管取充沛混合后样25ml。

③ 同上 ④ ⑤。

(3) 粉末状样品以及半固体样品

①将样品混合均一化。

②75%酒精棉消毒开启部位及其周围，再用火焰灭菌的剪刀开启，以无菌匙采取混合后样10g。

③参与90ml灭菌磷酸盐缓冲液，开盖瓶塞时瓶口部和瓶塞应在火焰经过1-2次，以杀灭从空气中落入杂菌。

④ 同上⑤。

留意

1

从罐头取样时，在外表放上小块酒精棉（倒上大批酒精）点火熄灭后开罐。罐头起子用酒精棉擦拭火焰灭菌后运用。

2

75%酒精必需保证一周换3次，假设容器内有清楚的污物应立刻改换；火焰灭菌的剪刀、镊子经过火焰4-5s即可

二、样液稀释方法

①从均质袋准确吸取样液1ml，如图

②沿管壁冉冉接种到含9ml磷酸盐缓冲液里，盖上试管塞后充沛震荡混匀为1：100稀释液。（勿使吸管*伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。）

③重复该操作，按需求配制1：1000、1：10000…稀释液。

④为增加样品稀释误差，在延续递增稀释时（原液在前稀释液在后），每一稀释液应充沛振摇，使其平均，同时每一稀释度应改换一支吸管。

⑤不要在稀释剂中吹洗吸管。

留意

1

样液稀释必需加以足够震摇，确保液体混匀，构成的菌落能以10倍递增或递减，契合逻辑性

2

车间产品依据加工工艺或对污染状况的估量选择适宜的稀释倍。（尤其留意葱、姜、蒜等无加热类产品、保管实验、外调新厂家、样品开发、原料等样品）。

三、样液接种方法：

① 从吸管筒沿筒上壁抽出吸管，在火焰旁吹洗吸耳球同时在吸管尾端插上吸耳球后，从吸管尾端至*快速经过火焰，并且排空吸管里残留的水，如图

② 吸管拔出均质袋样液内的深度不超越2.5cm处，准确吸取样品匀液，吸管尖不要碰着袋口。吸入的液体应先高于所要求的刻度, 然后提起吸管使其*分开液面并贴在袋内将液体调至所要求的刻度。

1ml、1ml、1m、0.2ml无菌操作区分以2～4s内完全注入已标识清楚的细菌数、大肠菌群、EC以及金黄色葡萄球菌平皿中，接种后迅速震荡平均，如图

③ 假设在接种前，某一样品液体放置超越3 min，应重新均质；为了验证稀释液、培育基、平皿、吸管等用具无菌需做空白对照。

四、倾注倒药方法

右手持培育基三角瓶（已放50-60℃的水浴中恒温）置火焰旁边，用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝，迅速倒人培育基约15ml，加盖后悄然摇动培育皿，使培育基平均散布在培育皿底部，然后平置于桌面上；也可将平皿放在火焰左近的桌面上用左手的拇指和食指翻开培育皿，再注入培育基，摇匀，如图

留意

1

培育基在50-60℃水浴中的保温时间不要超越4h；从采样末尾到分注培育基操作限于20min以内。

2

涂布的平皿外表需枯燥（枯燥不充沛易发作菌落分散，有冷凝水不利于细菌分别并且会招致细菌繁衍使结果失真；枯燥过火，会招致培育基裂开，不能用；枯燥适宜，则样液吸收完全、快）。

3

玻璃器皿的外表容易被细菌吸附，所以菌液注入平皿后应尽快将平皿内的样液和琼脂培育基充沛混合，否则细菌不容易分散。混合方法是将平皿倾斜和旋转使之充沛混合，但要留意不要让培育基从培育皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。

五、平皿培育

（1） 将平皿倒置放入恒温培育箱中，平皿间要留有空隙停止空气流通，使培育物的温度尽快与培育箱温度到达分歧，依照规则的温度和时间停止培育并坚持一定的湿度，经48h培育的琼脂培育基的失重不得超越15％，如图

（2）斜面、高层斜面、液体培育基立在试管架上放入恒温培育箱中，按所规则的时间温度停止培育，如图

课题范围：微生物学，化学，生命迷信，食品迷信与工程